倒置熒光顯微鏡使用指南

    1．按下接線板電源，打開計算機屏幕電源和主機箱電源，雙擊桌面上ApplicationSuite圖標進入程序。

    2．打開倒置熒光顯微鏡光源，如需使用汞燈，打開汞燈，在記錄本上記錄下汞燈上顯示的已用小時數。

    3．倒置熒光顯微鏡物鏡放大倍數有5倍，10倍，20倍，40倍，旋轉物鏡下轉盤改變放大倍數。

    4．倒置熒光顯微鏡明場使用方法：將透射光裝置的聚光鏡轉盤旋轉至BF檔。選擇合適的物鏡，調節焦距，用明視光源強度旋轉及透射光裝置上的光圈調節光源強度。將濾色塊放在第4或5檔。

    5．倒置熒光顯微鏡相差使用方法：將透射光裝置的聚光鏡轉盤轉至PH1檔〔物鏡為10x,20x時〕或PH2檔〔物鏡為40x時〕。用明視光源強度旋轉及透射光裝置上的光圈調節光源強度。將濾色塊放在第4或5檔。

    6．倒置熒光顯微鏡熒光使用方法：放下明場遮攔，拉開熒光遮攔棒，旋轉濾色塊轉盤，選擇合適的激發波長。用熒光光源視野調節旋鈕和熒光光源光圈調節旋鈕調節熒光的范圍和強度。

    7．圖像處理：在“攝取”菜單欄Mic1卡片下根據所選的物鏡倍數選擇放大倍數。拉開顯微鏡攝像頭操縱桿，單擊鼠標左鍵選擇一塊白色區域，單擊鼠標右鍵，進行白平衡?？梢酝ㄟ^改變攝取菜單欄攝像頭卡片下曝光，飽和，伽馬和增益改變顯示圖像的效果。明場或者相差模式，建議將增益放在零。單擊拍攝，新建自己的文件夾，保存圖片。

    8．熒光拍攝完畢，推進熒光遮攔棒。

    （1）如果下一個使用時間小于或等于1個小時，不需要關閉倒置熒光顯微鏡汞燈，記錄下汞燈使用時間。將明場電源旋至低處。將物鏡旋至空檔。關閉應用程序。

    （2）否則，使用完畢熒光，及時關閉汞燈，注意需長于半個小時，記錄下汞燈使用時間。將明場電源旋至低處，關閉明場電源。將物鏡旋至空檔。關閉應用程序。

    奧林巴斯倒置熒光顯微鏡IX73為例說明其使用步驟

    1．接通電源線

    打開電源開關，同時按下顯微鏡前面的按紐

    2．用光路選擇桿選擇"觀察"光路（有眼睛圖形），選擇所需放大倍數的物鏡，并將選擇環置于相應的位置（1－PHL：4X；2－PHC：10X和20X；3－PH2：40X，4為明場；熒光選擇鈕置于BF）使用光調節旋鈕和濾光片，調節至適當亮度

    3．將標本放在載物臺上，轉動粗微調調節焦距使視野內圖象清晰

    4．調節目鏡使觀察舒適

    5．如需拍照，則打開電腦

    進入軟件，將光路桿調至"旁路光口"（有相機圖形），即可拍攝并保存

    6．使用完畢后，關閉主開關（至O），取下電源插頭等到燈室完全冷卻后把防塵罩蓋上

    熒光觀察

    1．如使用熒光，要接通熒光光源的電源

    2．選擇所需波段的熒光，并用熒光調節桿調節亮度

    3．不觀察時，要及時使用光柵切斷熒光（●－關，○－開），避免樣品熒光衰減

    4．如熒光較暗，將周圍光亮度減至低（關燈，拉上窗簾）

    5．拍攝步驟同前

    正置與倒置熒光顯微鏡區別

    正置熒光顯微鏡與倒置熒光顯微鏡的區別主要是從顯微鏡工作方式上來區分的。正置熒光顯微鏡就是常規的熒光顯微鏡，物鏡在工作臺的上方進行觀察的方式。落射熒光顯微鏡與透射熒光顯微鏡是從照明方式上來區分的，落射熒光顯微鏡的激發光源是經過物鏡照射到樣品上的（一般樣品放培養皿里）。所以可以稱正置/倒置熒光顯微鏡。

    正置熒光顯微鏡和落射熒光顯微鏡是從顯微鏡工作方式上來區分的，倒置熒光跟正置熒光比較，倒置熒光顯微鏡的物鏡在所觀察物體底下，正置熒光顯微鏡的物鏡在所觀察物體的上面。倒置熒光顯微鏡一般是觀察在培養皿中培養的活體細胞，正置熒光顯微鏡一般是觀察可以放到載波片上看的物體。

    主要用途：物體構造的觀察，熒光的有無、色調比較進行物質判別，發熒光量的測定對物質定性、定量分析

    熒光顯微鏡按光源分：透射式與落射式

    透射式：激發光來自被檢物體的下方，聚光鏡為暗視野聚光鏡，使激發光不進入物鏡，而使熒光進入物鏡。它在低倍情況下明亮，而高倍則暗，在油浸和調中時，較難操作，尤以低倍的照明范圍難于確定，但能得到很暗的視野背景。透射式不使用于非透明的被檢物體。

    落射式：透射式目前用的較少，新型的熒光顯微鏡多為落射式，光源來自被檢物體的上方，在光路中具有分光鏡，所以對透明和不透明的被檢物體都適用。由于物鏡起了聚光鏡的作用，不僅便于操作，而且從低倍到高倍，可以實現整個視場的均勻照明。

    倒置熒光顯微鏡的用途是什么？

    倒置熒光顯微鏡是由倒置顯微鏡和落射熒光裝置組成。倒置顯微鏡具有在培養瓶或培養皿內進行顯微鏡觀察的特點，落射熒光裝置適用于熒光顯微術。該儀器特別適用于對活體細胞和組織、流質、沉淀物等進行顯微研究，是生物學，細胞學，遺傳學、免疫學等研究工作的理想儀器?？晒┛蒲?、高校、防疫和農牧等部門使用。

    什么是熒光顯微鏡的濾色系統？

    近年開始采用金屬膜干涉濾板，由于針對性強，波長適當，因而激發效果比較玻璃濾更好。如西德Leitz廠的FITC專用KP490濾板和羅達明的S546綠色濾板，均遠比玻璃濾板效果好。

    激發濾板分薄厚兩種，一般暗視野選用薄濾板，亮視野熒光顯微鏡可選用厚一些?；疽笫且垣@得更明亮的熒光和好的背景為準。

    濾色系統是熒光顯微鏡的重要部位，由激發濾板和壓制濾板組成。濾板型號，各廠家名稱常不統一。濾板一般都以基本色調命名，前面字母代表色調，后面字母代表玻璃，數字代表型號特點。如德國產品(Schott)BG12，就是種藍色玻璃，B是藍色的一個字母，G是玻璃的一個字母；我國產品的名稱已統一用拼音字母表示，如相當于BG12的藍色濾板名為QB24，Q是青色(藍色)拼音的一個字母，B是玻璃拼音的一個字母。不過有的濾板也可以透光分界濾長命名，如K530，就是表示壓制濾長530nm以下的光而透過530nm以上的光。還有的廠家的濾板完全以數字命名，如美國Corning廠的NO：5-58，即相當于BG12。

    激發濾板根據光源和熒光色素的特點，可選用以下三類激發濾板，提供一定波長范圍的激發光。

    紫外光激發濾板：此濾板可使400nm以下的紫外光透過，阻擋400nm以上的可見光通過。

    紫外藍光激發濾板：此濾板可使300～450nm范圍內的光通過。

    紫藍光激發濾板：它可使350～490nm的光通過。

    大吸收峰在500nm以上者的熒光素(如羅達明色素)可用藍綠濾板(如B-7)激發。